2025-03-31 14:28来源:本站
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基因捕获技术是目前最具应用前景的基因克隆方法之一。利用该技术建立的随机插入突变的突变体文库,可用于寻找、鉴定和研究大量未知功能和已知功能的活化基因,它是继自然突变、物理突变和化学突变之后发展起来的新的分子生物学方法。基因捕获载体是带有报告基因和/或选择标记基因的不完整的基因表达载体;这些载体所带的基因只有在整合到宿主功能基因内部且与融合的宿主基因编码框一致时才能得以表达。
基因捕获的优缺点:
用常规方法进行基因打靶研究需耗费大量的时间和人力。研究者必须针对靶位点在染色体组文库中筛选相关的染色体组克隆,绘制相应的物理图谱,构建特异性的打靶载体以及筛选中靶ES细胞等。通常一个基因剔除纯合子小鼠的获得需要一年或更长的时间。面对人类基因组计划产生出来的巨大的功能未知的遗传信息,传统的基因剔除方法显得有些力不从心,因此,基因捕获法应运而生。
利用基因捕获可以建立一个携带随机插入突变的ES细胞库,节省大量筛选染色体组文库以及构建特异打靶载体的工作及费用,更有效和更迅速地进行小鼠染色体组的功能分析。基因捕获的策略如图3所示.典型的基因捕获载体包括一个无启动子的报道基因,通常是neo基因。neo基因插入到ES细胞染色体组中,并利用捕获基因的转录调控元件实现表达的ES克隆可以很容易地在含G418的选择培养基中筛选出来。
从理论上讲,在选择培养基中存活的克隆应该100%地含有中靶基因。中靶基因的信息可以通过筛选标记基因侧翼cDNA或染色体组序列分析来获得。用基因捕获法在单次实验中可以获得数以百计的带有单基因剔除的ES克隆。这些克隆可以在96孔培养板中生长复制并用于基因型分析。大规模地保存和分析中靶ES细胞在小型的实验室中也是可行的.此方法的缺点是只能剔除在ES细胞中表达的基因。单种的细胞类型中表达的基因数目约为104。
现在的基因捕获载体从理论上来讲应能剔除所有在ES细胞表达的基因,因此,在ES细胞中进行基因捕获还是大有可为的。1997年后,克隆技术接连取得重要突破,用哺乳动物体细胞可以克隆出新个体。可以设想在体细胞中应用基因捕获可以剔除更多在发育晚期才表达的基因,其后通过核移植技术获得带有突变基因的动物个体,这不失为一种可以弥补以上缺陷的办法。用基因捕获法进行基因剔除的另一个缺点是无法对基因进行精细的遗传修饰。
选择育种
优点:简便快速
缺点:有局限性、不能创造新的基因型
原理:基因重组
方法:优中选优
杂交育种
优点:集优
缺点:耗时长、无法产生新的基因
原理:基因重组
方法:杂交、自交、测交
诱变育种
优点:提高突变频率
缺点:盲目性
原理:基因突变
方法:诱变
单倍体育种
优点:短时间内获得纯合体
缺点:高度不育、技术含量高
原理:染色体数目变异
方法:花药离体培养
多倍体育种
优点:器官大、营养丰富
缺点:发育延迟、结实率低
原理:染色体数目变异
方法:秋水仙素处理萌发的种子或幼苗
基因工程育种
优点:克服远缘杂交不亲和障碍、定向改变生物性状
缺点:可能会引起生态危机、技术难度大
原理:基因重组
方法:将目的基因转入受体细胞
你肯定跟我一个学校的、、还是高二 不解释…
优点
基因工程技术几乎涉及到人类的生存所必需的各个行业。比如将一个具有杀虫效果的基因转移到棉花、水稻等农作物种中,这些转基因作物就有了抗虫能力,因此基因工程被应用到农业领域;要是把抗虫基因转移到杨树、松树等树木中,基因工程就被应用到林业领域;要是把生物激素基因转移到支物中去,这就与渔业和畜牧业有关了;如果利用微生物或动物细胞来生产多肽药物,那么基因工程就可以应用到医学领域。总之一句话,基因工程应用范围将是十分广泛的。
缺点
基因工程安全性
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